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      鴨肝炎病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)

      產(chǎn)品型號(hào):

      廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

      訪問(wèn)量:1000

      更新時(shí)間:2022-09-27

      簡(jiǎn)要描述:

      鴨肝炎病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)

      引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

      詳細(xì)說(shuō)明:

      鴨肝炎病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)PCR反應(yīng)五要素:

      參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

      鴨肝炎病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)

      引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

      ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

      ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

      ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

      ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

      ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

      ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子*很有好處。

      ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

      引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

      鴨肝炎病毒檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)PCR注意事項(xiàng):

      1.基礎(chǔ)程序。

      2.?dāng)U增溫度和延伸溫度。

      3.反應(yīng)時(shí)間。

      4.循環(huán)次數(shù)。

      5.PCR 反應(yīng)液的配制。

      6.PCR技術(shù)的基本原理。

      7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)。

      8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

      9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。






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